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提取物评估的最佳规范
2014/10/17 09:49:20
PQRI浸出物和可提取物工作组（本文后面都称为PQRI）的一个重要的贡献就是他们所做的，与经口吸入和鼻腔吸入药物（OINOP）相关的，浸出物的不同安全限度的鉴定和论证8。虽然这一贡献本身已经意义重大，其另外一个同样重大的贡献是对这些剂型可提取物和浸出物研究最佳实践规范的描述。这个工作组提出的建议和支持数据大多数都是针对该具体剂型的，但该规范的总体原则可以应用于多种剂型和产品。
在规范公布之前，PQRI为进行可提取物和浸出物研究提供了基础性建议。该研究过程如下：
1.研发者（即与容器密闭系统相接触的药品的研发公司）应该首先基于功能性、可获得性、理化结构以及其它适当因素选择合适的包装组件。研发者应该从组件供应商处收集相关的化学信息以加速选择过程。作为选择过程的一部分，毒理学家应该对上述信息进行审议。
2.研发者应了解药品的特性（如每天的剂量，药品单元中的总剂量数）。
3.研发者应进行可控的实验室提取研究，并考虑报告鉴定的单体提取物以进行风险评估。
4.用于常规提取测试的提取和分析方法，应该在上述可控提取研究中开发并经过既定参数的验证。进行常规提取测试的目的是对来料进行常规质量控制。
5.在实验室提取研究结束之后，研发者应该进行药品的浸出物研究。这些研究得到的数据将作为产品风险评估的基础。浸出物研究除了包括监控浸出物在货架期的累积，还应该获取可提取物和浸出物之间相关性的数据。
6.应该进行浸出物的风险评估。
7.产品上市后，应对入厂原料进行常规提取测试以保证前述对可提取物和浸出物水平的风险评估仍然有效。
除了致力于对安全性评估进行恰当的总体设计等方向性问题以外，PQRI还解决了具体最佳实践操作规范问题，这些规范是风险评估得以完成的手段。由PQRI工作组建立的第一个规范是数据采集，特别是“…团队应最大限度地获得关于每一个组件的配方以及生产-加工过程所有可以得到的信息。”有关信息包括如下几种：
1.包装容器的构成材料。
2.所有包装组件的添加剂的构成，包括详细的化学成分和每种添加剂的化学反应-降解性质。
3.聚合-形成过程，包括相关的加工助剂。
4.组件的加工过程，包括用来促进加工过程的试剂，以及组件成品的所有清洁-洗涤过程。
5.组件成品经历的所有贮存或运输条件。
如果得到的信息足够完整和全面，从理论上来说，至少从材料选择方面可以排除进行实验室可提取物研究的需要。然而，最常见的情况是这些信息至多为材料的选择提供了粗略的筛选。尽管如此，工作组建议将采集的信息作为初步毒理学评估基础，评估的主要目的是材料选择。除了材料选择，数据的采集还有助于实验室设计可控的提取物研究方法（对于有疑问的材料，以已知及未知信息为基础设计一个紧凑而有效的研究）。
PQRI最佳规范的基础是可控的提取研究。根据定义，可控的提取研究是“就某个．．．容器密闭系统关键组件可提取物进行的定性和定量的实验室检测”。很明显，可控的提取研究的首要目的是获得一套完整的可提取物概况数据，“完整”定义在PQRI确立的各种安全性限度之内。从实践的角度看，如何使用这样一套完整的可提取物概况数据更为重要。无庸置疑，完整的可提取物研究方案将用于完成材料的选择过程以及候选材料的毒理学评估。而且，完整的可提取物总体数据还是研发和验证常规质量控制方法以及购进材料接受标准的基础。显然，完整的可提取物数据还为可提取物和浸出物之间的关系研究提供了方便。最后，可控的提取研究使用的方法也会成为研发（和验证）浸出物研究方法的起点。
通过对四种“模型”材料（三种弹性体和一种塑料）测试获得的认识增进了他们的专业经验和见解，在这些经验和见解的指导下，PQRI工作组就可控的提取物研究提出了以下建议[2]：
1. 可控的提取研究应该采用多种不同极性的溶剂进行强力提取。PQRI团队选择了二氯甲烷、２－丙醇、己烷作为恰当的溶剂，因为它们代表了宽泛的极性（及溶解性能）和宽泛的沸点，这些溶剂相对惰性，在典型的实验室中相对容易处理且具安全性，也较容易得到较高纯度的试剂。
2. 可控的提取研究应该包括多种提取技术。PQRI工作组选择索氏提取、超声和回流，因为这些技术在工业实验室普遍使用，这些技术在不同用途、安全使用、有效使用方面有着较长的历史，而且他们还使用了典型分析实验室通常都有的设备。
3. 可控的提取研究应该包括认真的样品制备。PQRI工作组认为，在选择和正确运用提取技术和提取物分析技术方面，一个重要的考虑因素就是相容性问题。PQRI工作组强调，提取物及其分析方法必须相互兼容，在不兼容的情况下会有“奇怪”的事情发生，如“神秘”提取物的出现（气相色谱系统中进样器产生的“可提取物”），以及其它分析假象。
4. 可控的提取研究应该采用多种分析技术。PQRI工作组列出的分析技术包括:有机提取物单体检测、鉴定、量化技术：GC/MS,LC/MS,LC/DAD(DAD=二极管阵列检测)；有机提取物检测、量化技术：GC/FID, LC/UV；无机提取物检测、鉴定、量化的技术：ICP/MS,ICP-AES,SEM/EDX。
5. 可控的提取研究应该包括鉴定提取物单体的明确和系统化的过程。PQRI工作组认识到，尽管提取物质的鉴定很多时候类似一种“技艺”，但这个“技艺”必须以全面且系统的概念为基础并受其指导。例如，PQRI工作组建议有五类信息可以用于有机化合物的鉴定，包括质谱碎片，分子量确认，元素组成确认，质谱与质谱库或文献图谱的匹配，质谱和色谱保留时间与标准的一致，根据可以获得的特定有机化合物的支持信息，化合物的鉴定可以能被描述为暂定的、有把握的、或者是确认的。
6. 可控的提取研究使用经过优化的“权威”提取技术。实验室提取研究中使用的权威提取技术应该达到以下实验目的。首先，至少它们应该能得出代表（较实际接触）更坏情形下的潜在浸出物状况的提取物特征数据。其次，它们应该是已经被了解的技术，而且这些技术的运行特点已经建立了档案，尤其是与获取提取物渐进水平相关的性能特征。
PQRI工作组对硫化弹性体测试样品用二氯甲烷进行索氏提取的方法进行了优化。优化后的提取方式是将7克经剪切的材料与200毫升二氯甲烷提取8小时（提取器中溶剂的滴速是20滴/分钟）。工作组还对聚丙烯测试样品用2-丙醇进行索氏提取的方法进行了优化。优化提取方式是每25毫升溶剂中含1克样品（总表面积为50cm2），溶剂是50:50的2-丙醇和四氢呋喃的混合溶剂,提取时间为3小时。
7. 在可控的提取研究过程中，药品研发者应该重新核查供应商提供的组件配方的信息。PQRI工作组强调，进行可控的提取研究的团队应该重新审视供应商提供的信息以发现分析异常或者可控的提取研究结果与供应商信息之间的差异。没有发现供应商披露的添加剂的情况，或相反发现了供应商没有显示的可提取物的情况都需要对可控的提取研究结果、供应商信息和/或其它可获得的信息进行严格检查。
8. 可控的提取研究应该以 AET为指导，而AET应基于公认的的安全性限度。
9. 有些化合物被认为是“特例”化合物，需要采用有明确技术指标的特定分析方法进
行评估。PQRI工作组确定了以下化合物由于毒理风险增加而成为“特例”化合物，需要采用特异性和敏感性的分析方法。这些化合物应被视为OINDP的特例，但未必适用于其它产品种类及容器密闭系统或对其有限定性作用。然而，如果这些化合物出现在个别容器/密闭系统的提取物中，那么应该且有必要建立这些化合物可能的安全性影响信息档案。
①多环芳烃（PAHs）或多核芳烃（PNAs）：萘、苊烯、acetaphthalene、芴、菲、蒽、
荧、芘、苯并(a)蒽、屈、苯并(b)荧蒽、苯并(k)荧蒽、苯并(e)芘、苯并(a)芘、茚并(123-cd)芘、二苯(ah)蒽、苯并(ghi)苝。
②N -亚硝胺：N -亚硝基二甲胺、N -亚硝基二乙胺、N -亚硝基-二-正丁胺、亚硝基吗
啉、N -亚硝基哌啶、N -亚硝基吡咯烷。
③ 2-巯基苯并噻唑（MBT）：
10. 应该对可提取物的定性和定量的数据结果加以讨论,并由毒理学家进行评价,以便在产品研发的早期对可提取物单体（潜在的浸出物）的潜在安全性进行判定。本书其它部分已经讨论过分析化学家和毒理学家恰当的、必要的、正确的和紧密的合作。
监管法规的制订趋向于原则性而不具备具体可操作性，这种现象成为催生PQRI指南出现的一个主要动力；规定要求，某个特定的工作必须要完成，至于如何完成并未详细说明。尽管PQRI指南对可控的提取研究的设计、操作、结果分析必须考虑的方面做出了进一步的明确，有些遗憾的是这些指南仅限于一类特定的药物剂型。例如，指南虽然明确规定了多种溶剂的使用，但是在OINDP范围以外的剂型应该使用什么溶剂没有给出统一的意见或指导。这不是PQRI工作的缺陷，因为OINDP才是他们明确且最重要的工作重点。尽管如此，制药工业还是非常需要研发一套成熟的、公认的、广泛被接受的“模拟溶剂”和“标准化提取条件”。而用于检验食品包装的模拟溶剂和“标准化条件”已经被有效且高效地用于食品工业。
为了更深刻的理解PQRI规范，能够更为直接的受益于这个团队的研究成果、经验及发现，读者可以参阅PQRI文献或者参考文献。
来源：《药品与包装材料的相容性》
